《世界肿瘤杂志》论文发表
由上海市预防医学会主办，世界肿瘤杂志社联合主办，是中国抗癌协会系列杂志，由著名病理学家朱维增教授主编，是医学专业类中英文版学术性期刊。本刊坚持基础与临床结合，提高与普及结合，预防与治疗结合，中西医结合的原则。既是反映国内外肿瘤研究的新理论、新成果、新技术、新经验，又要注意反映基层单位在肿瘤预防治疗的丰富实践经验。旨在加强肿瘤的预防、临床、教学和基础研究工作者之间广泛的联系，促进学术交流，推动这些领域工作的开展，加快医学科学尤其是肿瘤病学的发展，努力为人类的健康和文明作出积极的贡献。
发文量：1119被引量：591 H指数：8 影响因子：0.155300006270409立即指数：0被引半衰期：-1引用半衰期：-1期刊他引率：1平均引文率：0
主管单位： 主办单位：上海市预防医学会;世界肿瘤杂志社 国内刊号： 国际刊号：1683-0342 邮发代号： 发行周期：季刊
目录
专家论坛
线粒体蛋白Smac／DIABLO与肿瘤 (1)曾辉;黄绪群（综述）;伍钢;龙志雄（审校）
文摘
VEGF—D、MMP-7在胃癌组织中的表达及其与预后的关系（摘要） (8)徐桂芳;邹晓平;张伟杰;张丽莉;顾超
专家论坛
铂类抗肿瘤药物的临床研究进展 (9)王少毕（综述）;罗政（审校）
结直肠癌的化疗现状 (12)吴庆宇，倪克棵
论著
可切除低位直肠癌术前同步放化疗临床观察 (17)陈丽;余美剑;严新;潘颖;温宁笑
文摘
VEGF和MVD在术前接受过肝动脉栓塞化疗的肝癌组织中的表达及临床意义（摘要） (19)俞武生;卢春丽;王在国;林志强;郭荣平;韦玮
论著
维持性血透患者血清肿瘤标志物的检测及意义 (20)蒋卫杰;孔绍仁;宋锦叶
文摘
趋化因子受体CCR7在胃癌组织和细胞株中过度表达（摘要） (22)严燕国;吴瑞乔;沈新明;杨鹏平;王益
论著
WT1与P53在卵巢浆液性癌中的表达及意义 (23)孔饱青;孙振柱
文摘
乳腺癌患者预后及病理因素与FAT10mRNA表达的相关性（摘要） (25)李志红;王志明;方力
论著
青年大肠癌临床及病理特征分析 (26)徐巧元
RNAi介导PEG10基因沉默对肝癌HepG2细胞Wnt／β-catenin信
NAi介导 PEG10基因沉 默对肝癌 HepG2细胞Wnt／13．catenin信号通路及增殖的影响
张关、
摘要：目的 探讨PEG10基因对Wnt／31一catenin信号通路的影响在人肝癌发病机制中的作用，为肝癌的基
因治疗提供新思路。方法 应用脂质体转染技术将靶向PEG10的短发夹状RNA (shorthairpin RNA，
shRNA)转染HepG2 胞，利用半定量RT-PCR分别检测PEG10、31-catenin和Wnt1基 mRNA表达水平；
同时应用MTT比色试验检N~HepG2N胞增殖。结果 转染PEG10一shRNA后HepG2细胞PEG10一mRNA水
平下降65．6％，同时，B—catenin(CTNNB1)、Wnt1基因mRNA水平随之分别下降52．5％、96．1％。靶向封闭PEG10基因的表达明显抑制HepG2细胞增殖。结论 靶向封闭PEG10可明显下调肝癌细胞
wnt／D—catenin信号通路关键因子pcatenin (CTNNB1)、Wnt1mRNA表达水平，PEG10基因对肝癌的促
进作用可能与激活Wnt／31catenin信号通路有关。PEG10具有促进HepG2N胞增殖作用。
关键词：PEG10；Wnt／31一catenin信号通路；3-连环素；WntI；RNA干扰 (RNAi)；肝癌
中图分类号：R730．53 文献标识码
父系表达基因10(paternalyexpressedgene10，PEG10)是2001年Ono等片jcDNA微阵列在肝细胞癌组织中发现的一个由反转座予衍生来的父系表达的遗传印记基因，定位于人类7弓’染色体长臂2号带1号位 (7q21)[1-2]。研究表明，PEG10基因在绝大多数肝癌组织及细胞系中特异性高表达，而在正常肝脏组织中不表达，它具有比甲胎蛋白更高的肝癌组织特异性，同时也具有相对器官组织特异性[j。
收稿日期：2011．01．03；修回后期：2011．02．15
作者单位：上海市闸北区市北医院消化内科， 海 200435
作者简介：张美平，女，硕j±研究生．
Okabe等【4J研究表明，高表达的PEG10基因对肝癌有促进作用，但其促癌机制尚未完全阐明。
近年来已有研究表明，异常激活的Wnt／13 catenin信号通路在抑制肝癌形成中起重要作用，PEG10与Wnt／13．catenin信号通路在肝癌中的作用均与抑癌基因SIAH1有 关联，PEG10可 能通过与SIAH1相互作用而影响wnt／B．catenin信号通路I4 】。由此，我们猜~IJPEGIO基因对肝癌的促进作用可能是通过激活Wnt／13一catenin信号通路实现的。本研究通过应用RNAi技术沉默PEG10，观察靶向封闭PEG10对Wnt／13一catenin信号通路的关键因子13一catenin
·30· 世界肿瘤 主 2011年 第 10卷 第 1期 WorldJournalofTumorVolume10，Number1，Mar2011
和 Wnt1基 因mRNA表达水平的影响，及对肝癌HepG2细胞增殖的影响，探讨PEG10可能的致肝癌机制。
1 资料与方法
1．1 细胞系 人肝癌细胞株HepG2由华中科技大学协和深圳医院中心实验室提供，使用RPMI 1640
完全培养基 (含10％胎牛血清及 100gg／ml青 、链霉
素 )在37。C、5％CO2细胞培养箱内培养。随时观察细胞的生长状态和数量，及时换液并传代。待细胞进入对数生长期，即可用于下一步实验。
1．2 主要试剂及仪器 RPMI 1640培养基 (美国Gibco)，胎牛血清 (BiochromAG)，噻唑蓝MTT、二甲基亚砜DMSO (Sigma)，TrizolRNA提取剂
(invitrogen )， RevertAidTM First Strand cDNA
Synthesis Kit、 Platinum Taq DNA polymerase
(Fermentas)，DNA引物 (广州达晖生物技术有限
公司 )，PEG10 shRNA、GAPDH shRNA、HK通用
阴性对照、NegativecontrolFITC(武汉晶赛生物工程技术有限公司)，HiPerFect¨ⅥTransfectionReagent (Q1AGEN)，CO2细胞培养箱 (美国Thermo公司)，微量加样枪 (eppendorf)，酶标仪 (美国DYNEX公司 )，倒置显微镜 (日本Olympus公司)、Axiovert40 CFL荧光倒置显微镜 (德国ZIESS公司)，PTC一200型PCR仪购 (MJ公司 )、紫外分光光度仪 (日本岛津 UV-1600)，凝胶成像仪 (法 国Vilber Lourma
Bio—visionl000)。
1-3 PEG10-shRNA 的设计与制备 采用 Hiperfect
Transfection Reagent介导的脂质体转染技术，参阅其产品说明书进行转染。 shRNA 靶序列、GAPDH—shRNA、通用阴性对照 shRNA(HK)、荧光对照 siRNA (cN—FITC)的设计及寡聚核苷酸的合成均由武汉晶赛生物工程公司完成，HK 的选择满足下列条件：与 PEG10一mRNA 无同源性，并经BLAST分析，与其它基因亦无同源性。采用体外转录法合成 shRNA。最后选出 2对 shRNA 为目的shRNA，分别命名为 PEG101、PEG102，对应基因
序列为 PEG101：5’一GTCGCTGTCTGCTCTGATTT
T．3’，PEG102：5’一GCACAACTACCCAGCTTTCAT-
3’。
1．4 实验分组 实验分为4组，空白对照组：HepG2常规培养，不予干预；阴性对照组：转染通用对照shRNA(HK)：阳性对照组：转染 GAPDH—shRNA；
实验组：转染 PEG10一shRNA(通过预实验选择抑制
率较高的 PEG10一shRNA进行正式实验)。以上各组