免费医学论文发表 -作为日本脑炎病毒检测计划的一部分，对美国军事设施进行蚊子监测：2016年至2021年

抽象

日本脑炎病毒（JEV）继续在整个东南亚和西太平洋地区传播，24个国家的约30亿人面临感染风险。2016年至2021年期间，在日本冲绳的四个军事设施进行了针对JEV蚊媒的监测。在来自20个不同物种的10,426只蚊子中，没有一只蚊子对JEV呈阳性。收集到的蚊子种类最多的是白纹伊蚊（36.4%），其次是西蒂斯库蚊（24.3%）和亚白纹库蚊（19%）。观察到不同地点的蚊子种类种群存在统计学上的显着差异。随着时间的推移，土地利用的变化似乎与每个地点捕获的蚊子的种类和数量有关。冲绳的蚊子种群中似乎没有JEV，但有必要对家猪和Ardeid鸟类进行进一步研究。

作者摘要

日本脑炎（JE）是一种媒介传播的疾病，对地球三分之一以上的人口具有重要的公共卫生意义。虽然乙脑首次在日本报道，但今天最严重的疫情发生在中国和印度。自2015年以来，日本脑炎疫苗成为派往日本或韩国的美国军事人员的强制性疫苗。为了评估驻扎在冲绳的军人感染乙脑的风险，2016年至2021年期间对四个军事设施进行了蚊子监测。收集了一万多只蚊子，确定了物种，并进行了PCR测试。这些样本均未呈日本脑炎病毒阳性，但仍需进一步研究。

数字

Fig 3表1Fig 1Table 2Table 3Table 4Fig 2Fig 3Table 1Fig 1Table 2

引文： Olson MF， Brooks C， Kakazu A， Promma P， Sornjai W， Smith DR， et al. （2023） 作为日本脑炎病毒检测计划的一部分，对美国军事设施的蚊子监测：2016年至2021年。公共科学图书馆 Negl Trop Dis 17（10）： e0011422. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422

编辑 器： 玛丽安吉拉·博尼佐尼，意大利帕维亚大学

收到： 5月 26， 2023;接受： 2023 年 10 月 5 日;发表： 10月 19， 2023

这是一篇开放获取的文章，没有任何版权，任何人都可以出于任何合法目的自由复制、分发、传输、修改、建立或以其他方式使用。该作品在知识共享CC0公有领域奉献下提供。

数据可用性： 包含本研究结果基础数据的CSV文件可在支持信息中找到。

资金： 这项工作得到了武装部队卫生监测司——全球新发感染监测（AFHSD-GEIS）的财政支持，奖励P0091_21_18（TD）、P0049_22_18（MO）和P0058_23_18（MO）。资助者在研究设计、数据收集和分析、发表决定或手稿准备方面没有任何作用。没有作者从本研究的资助者那里获得任何薪水。

竞争利益： 我们没有需要披露的利益冲突。

介绍

乙型脑炎是西太平洋和东南亚最具破坏性的病毒性脑炎之一，24个国家约有30亿人面临感染风险[1]。Quan 等人 [2] 估计，2015 年全球约有 100,000 例乙脑病例，估计有 25,000 人死亡，其中中国和印度的疾病负担最大。

乙脑是由日本脑炎病毒（JEV）引起的，JEV是黄病毒科的一种黄病毒，以涉禽为宿主，猪（野生和家养）为扩增宿主，蚊子为媒介，维持在地方性动物病传播周期中[3]。由于繁殖速度快、动物疫苗接种不稳定和直接传播，家养猪场特别容易受到病毒扩增的影响。在新加坡，在没有养猪业的情况下，JEV的血清学证据表明，其他脊椎动物也可能作为扩增宿主[4]。Culex tritaeniyorhynchus Giles，1901，历来被认为是主要载体[5,6]。然而，JEV也在另外13种蚊子中检测到：白纹伊蚊，Ae。韦克萨·vigilax， Armigeres subalbatus， Cx.环状体，Cx。比塔尼奥林丘斯，Cx。镰刀菌，Cx。盖利杜斯，Cx。皮皮恩斯，Cx。伪维什努伊，Cx。五筋膜虫，Cx。西蒂恩斯和Cx。vishnui，所有这些都在实验室环境中被证实为JEV的感受态载体[7]。

乙脑于1871年在日本首次报道，包括人类和马[8]，1900年代初至今，日本、中国、印度、关岛、孟加拉国、马来西亚和尼泊尔等国均有重大暴发[9]。此后，积极的疫苗接种工作减少了传播，2015年估计预防了45,000例感染[2]。1991年，驻扎在冲绳的3名美军人员出现与脑炎一致的症状，随后诊断为JE，1例患者出现严重的神经系统后遗症[10]。3例均未接种过疫苗，发病前也未出岛旅行[10]。在这次疫情暴发之前，冲绳最后一例已知的乙脑病例发生在1974年[10]。此后，1980年有1例乙脑病例，1998年有1例，最后，一名没有旅行史的一岁男孩于2011年在冲绳感染了乙型肝炎。自2017年以来，日本全国乙脑的发病率每年低于10例，2016年至2022年期间冲绳的病例为零（表1）。

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表 1. 蚊媒疾病-日本（冲绳）。

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美国印太司令部（USINDOPACOM）有大约375,000名美国军事和文职人员被派往该地区。其中，约有30,000人驻扎在冲绳。自2015年2月1日起，所有被永久指派或临时派往日本或韩国30天或以上的现役飞行员都必须接种日本脑炎疫苗[11]。该疫苗也于2016年11月1日成为美国海军和海军陆战队成员的强制性疫苗。

在这项研究中，我们旨在发现2016年至2021年间冲绳成年蚊子中JEV的发病率。由于农业实践的变化和日本人口的高疫苗接种率，我们假设JEV的流通率很低。

材料和方法

研究区域

2016年5月13日至2021年10月21日，在冲绳的四个军事设施对JEV进行了监视（图1）。冲绳（也称为琉球群岛）是日本最南端的县，位于大陆以南约400英里处，由东海的150个岛屿组成，其中最大的岛屿是冲绳岛本身。气候属亚热带暖温带气候，平均气温22.9°C，1月最低气温17.3°C，8月最高气温约28.0°C，年降雨量1,817毫米（climate-data.org）。冲绳岛的景观大致可以分成两半;北半部森林和山区较多，主要由山原国家森林组成;南半部包含更发达的城市空间。地点1，大隈海滩度假村（北纬26°44'17.9“，东经128°09'32.3”），位于岛北部的岬角上，周围环绕着各种农作物的田地。地点2，汉森营地（北纬26°27'22.7“，东经127°55'14.0”），靠近一个饲养山羊、鸡和鹅的当地小型农场。一条小河和水库也靠近这个位置，野猪栖息在森林地区。站点3位于嘉手纳空军基地的弹药范围（北纬26°22'28.8“，东经127°46'13.1”），森林茂密，保存完好，周围环绕着各种农田。站点4位于Camp Kinser（北纬26°15'14.1“，东经127°41'29.4”），位于沿海港口附近，位于岛上人口稠密的城市地区。

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图1. 指示蚊子诱捕地点的阶梯图。

（地图创建于 QGIS 版本 3.10.11 A 拉科鲁尼亚。内容是 Esri 的知识产权，经许可在此使用。版权所有 2023 Esri 及其许可方。保留所有权利。地点1：大隈;站点 2：汉森;地点3：嘉手纳;网站4：金瑟。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422.g001

蚊虫采样

被动箱式捕集器（PBT）（BioQuip Products Inc.，Rancho Dominguez，CA）用于使用二氧化碳（CO2）水箱和糖诱饵核酸保存卡，颜色为红色，贴在陷阱内壁的左右两侧，如Hall-Mendelin等人、Ritchie等人和van den Hurk等人所描述的那样 [12-14]。每周收集陷阱并放在一个大塑料袋中，然后用一个大冷却器运送到实验室，在那里整个陷阱被放置在冰箱中以对成年蚊子实施安乐死。所有四个地点的疏水阀每周更换一次，一氧化碳2根据需要监控和调整流量，并在空罐时更换。2016年和2018年，使用蚊子磁铁（MM）（Woodstream Corporation，兰开斯特，宾夕法尼亚州）和20磅丙烷罐，Reiter / Cummings妊娠陷阱（BioQuip Products Inc.，Rancho Dominguez，CA）和Biogents妊娠自杀陷阱（BG-GAT1）（Biogents，Martinsburg，WV）进行了额外的采样。每种疏水阀类型的照片可在支持信息中找到（S1图）。

鉴定

成年蚊子按性别分开，并使用美国陆军医学中心昆虫学分部的“冲绳蚊子图解钥匙”以及“日本（包括琉球群岛和小笠原群岛）和韩国（双翅目：Culicidae）的成年蚊子和幼虫蚊子的修订”进行形态鉴定[15]。将同一物种的雌性蚊子放入每管不超过20只蚊子的池中的1.5ml微量离心管中。加入750μl缓冲液AVL（德国希尔登Qiagen），并将蚊子彻底匀浆。蚊子裂解物样品通过联邦快递运往泰国玛希隆大学分子生物科学研究所进行分子分析和病原体检测。样品在室温下运输，平均运输时间为4天。

聚合酶链分析

根据制造商的说明，使用QIAamp病毒RNA迷你试剂盒（德国希尔登Qiagen）从单个或混合的单一物种蚊子裂解物中提取RNA。使用 RevertAid 逆转录酶（赛默飞世尔科技，马萨诸塞州沃尔瑟姆）在 10 μL 反应中合成互补 DNA，其中包含 4 μL RNA 模板、2.5 μM 随机六聚体（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）、100 单位 RevertAid RT、5 单位 RiboLock RNase 抑制剂、1 mM dNTP 和 1X 反应缓冲液。热循环条件按照制造商的协议进行。

使用SuperScript III一步法RT-PCR系统（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）进行泛黄病毒筛查。扩增在含有 1 μL RNA 样品、0.4 μL 铂 Taq DNA 聚合酶、每个 dNTP 0.4 mM 、3.2 mM MgSO 的 10 μL 反应中进行4和200nM的每种泛黄病毒引物（Flav 100F 5'-AAYTCIACICAIGARATGTAY-3'和Flav 200R 5'-CCIARCCATRWACCA-3'）。热循环是根据先前发表的方案进行的[16]。

专门针对JEV的扩增是使用DreamTaq DNA聚合酶（赛默飞世尔科技，马萨诸塞州沃尔瑟姆）进行的。在含有 1 μL cDNA、200 nM dNTP、500 μM MgCl 的 10 μL PCR 混合物中测定反应2、0.25单位的DreamTaq DNA聚合酶、1X DreamTaq缓冲液和250nM的特异性引物（JP1_Fw 5'-GGAAATGAAGGCTCAATC-3'和JP2_Rv 5'-GAAGTCACGATTGCCCATTCC-3'）[17]。使用适当的阴性（无RNA）和阳性（北京-1 JEV RNA原量）对照进行扩增。PCR产物在1.0%琼脂糖凝胶上通过电泳分离，产物通过溴化乙锭染色可视化。通过裂解物的独立扩增以及条带的克隆和测序来重新筛选推定的阳性。

我们注意到，本研究中使用的JEV引物是基于JEV基因型III序列的，随着时间的推移，该基因型在亚洲已在很大程度上被基因型I所取代[18]，因此，研究中使用的引物可能对检测循环JEV的敏感性较低，尽管目前没有证据反驳或支持这一假设。

统计分析

为了比较每种蚊子物种按收集地点和诱捕器类型的平均计数，我们使用Wilcoxon秩和检验进行连续性校正，使用Benjamini-Hochberg程序调整P值（P≤0.05被认为是显着的）。

我们对陷阱计数进行了标准化，以反映每个陷阱的 7 天陷阱周期。

所有统计分析均在 R 版本 4.2.2 [19] 中使用 RStudio 版本 2022.12.0+353 [20] 进行。

结果

在这项研究过程中，使用所有诱捕方法共捕获了10,426只蚊子（表2）。总人口在4个地点中均匀分布（地点1：n = 2,613;地点2：n = 2,167;地点3：n = 2,501;地点4：n = 3,145）。其中，最丰富的蚊子种类是Ae。白纹（n = 3,793; 36.4%），其次是Cx。sitiens （n = 2,536; 24.3%）， Ar.亚白鲸（n = 1,985; 19%）和Cx。五筋膜（分别为13.7%）。只有 369 （3.5%） Cx。在研究期间，Tritaeniyorhynchus被困，2019年捕获的数量最多（n = 59），2020年和2021年收集到零。

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表 2. 2016-2021年日本冲绳收集点捕获的蚊子种类和数量。

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诱捕方法存在显著差异。MM仅在2016年使用，但占7,215只成年雌性蚊子。PBT在所有研究年都被利用，占第二高的蚊子数量（n = 3,155），BG-GAT1和Reiter/Cummings妊娠陷阱捕获的数量相对较少（分别为n = 32和n = 24）。MM的7天平均值为195.00（±43.28 SEM）;PBT，30.37（±6.48 SEM）;对于BG-GAT1,12.00（±6.00 SEM）;对于重力陷阱，44.8（± 10.52 SEM）。MM和PBT捕获的7 d平均计数显著高于妊娠陷阱（P < 0.005），MM的平均值计数也显著高于PBT（P < 0.0005）。

为了根据地理位置分析种群趋势，仅包括使用PBT捕获的蚊子（表3）。在Site 1捕获的最丰富的物种是Ae。白纹鱼（n = 1,081; 89.7%）。在站点2，最丰富的物种是Cx。sitiens（n = 446; 61.3%），但Ae数量很大。白纹（n = 98; 13.5%） Cx。五筋膜（n = 87;12.0%），甚至Cx。鉴定出Tritaeniyorhynchus（n = 62;8.5%）。阿。亚白蜥是位点3的优势种（n = 560; 68.1%），Ae数量众多。白纹病（n = 199;24.2%).最后，站点4的特征主要由Cx。sitiens（n = 205;51.1%）和Ae。白纹（n = 119;29.7%），但也有大量的Cx。Tritaeniyorhynchus （n = 50; 12.5%）。

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表 3. 2016-2021年日本冲绳仅用PBT捕获的蚊子种类和数量。

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没有蚊子或核酸保存卡检测出JEV阳性。此外，在用泛黄病毒引物筛选后，筛查JEV的样品均未特别显示任何扩增产物。然而，虽然许多黄病毒，包括JEV的成员，但黄病毒属的Kokobera和Nataya病毒血清复合物与JEV具有相同的传播载体[21]，据我们所知，这些病毒在日本从未有过报道。

每个 Ae 集合的平均计数明显更高。在站点1相对于站点2-4观察到白纹（P < 0.005）。Ar的平均种群明显更高。与地点1（P = 0.0088）、2（P = 0.0088）和4（P = 0.0075）相比，在站点3发现了亚白鲸。对于 Cx。与地点1（P = 0.036）和地点3（P = 0.036）相比，在站点2观察到的蚊子平均计数显着更高。Cx 的平均计数。在站点4捕获的sitiens也明显高于站点1（P = 0.036）。在其他物种中没有观察到进一步的统计学显着相关性（Ae。日本，Cx。五筋膜和Cx。 Tritaenioryhnchus）。

本研究中发现的六种最多产的物种>（如表3所示，总共有40只蚊子）也由每个地点使用前面提到的统计分析进行分析（表4和图2）。在位点 1，Ae 的平均计数显著更高。观察到的白纹动物比任何其他物种都多（P < 0.005）。在站点 2，Cx。与Cx相比，sitiens的平均计数明显更高。五筋膜（P = 0.00083），Ar。亚白骨（P = 0.01644）和Ae。日本（P < 0.0005）。在站点 3，Ar 的平均计数明显更高。与Cx相比，检测到亚白蛾。五筋膜虫，Cx。西蒂恩斯和Cx。Tritaenioryhnchus。然而，艾。该地点的白纹鱼种群也明显高于Ae。日本 （P < 0.005）， Cx.五筋膜（P < 0.005）和Cx。Tritaeniyorhynchus（P < 0.005）。最后，在站点4，Ae的平均种群明显更高。白纹与Ae相比。日本（P = 0.00058），Ar。亚白细胞（P = 0.00129），或Cx。五筋膜（P = 0.00129）。Cx 的平均计数。sitiens明显高于Ae。日本（P = 0.04622），但不明显高于其他物种。

A- 站点 1，B- 站点 2，C- 站点 3，D- 站点 4

白纹伊蚊 = 白纹伊蚊;Aejap = 日本伊蚊;Arsub = Armigeres subalbatus;Cxqui = 五筋膜库蚊;Cxsit = 库蚊;Cxtri = 三绦虫库蚊

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表 4. 按地点和物种划分±每次收集（7 个诱捕夜）捕获的雌性蚊子的平均 SEM 数量。

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图2. 2016-2021 年按物种和地点划分的每次诱捕事件的平均 （± SEM） 数量。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422.g002

还观察到不同蚊子类群的相对丰度随时间的显着变化（图3）。例如，Ae 的平均计数。在站点 1 捕获的白纹蚊从 2016 年的每次诱捕事件 42.82 （± 17.79 SEM） 下降到 2021 年的 2.57 （± 0.72 SEM）。明显更多的Cx。与往年相比，2021年在站点2捕获了sitiens（P < .05）。

A- 站点 1，B- 站点 2，C- 站点 3，D- 站点 4

白纹伊蚊 = 白纹伊蚊;Aejap = 日本伊蚊;Arsub = Armigeres subalbatus;Cxqui = 五筋膜库蚊;Cxsit = 库蚊;Cxtri = 三绦虫库蚊

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图3. 按物种划分的种群相对丰度随时间的变化。

注意：仅使用PBT数据，因为每年在所有研究地点都一致使用PBT。

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讨论

我们的研究调查了 2016 年至 2021 年间在日本冲绳捕获的成年蚊子中 JEV 的发病率。虽然在我们的监测中捕获了几个已确认的JEV感受态载体，但没有检测到JEV。有趣的是，对冲绳县政府历史数据的回顾显示，2016-2021年日本脑炎本土病例为零（表1），上一次记录的乙脑病军事病例是在1991年。

冲绳成年蚊子明显没有乙型脑炎病毒可能是由于许多因素造成的。农业实践的改变大大减少了岛上稻田的数量，这是Cx的首选繁殖环境。Tritaeniyorhynchus。2015年、2019年和2020年左右的土地利用分析似乎表明，“稻田”和“耕地”减少，“建成”面积增加。（S2图）。二战后，水稻和小麦种植被甘蔗和其他经济作物所取代[22]。这些景观变化，特别是稻田的减少和“建成”面积的增加，可能导致蚊子繁殖栖息地减少，特别是对Cx而言。Tritaeniyorhynchus也得到了我们收集的数据的支持。

猪和阿德德鸟类被认为是JEV传播周期中的宿主和扩增宿主[6]，但对冲绳这些动物中JEV的状况知之甚少。Nidaira等人[23]的一项研究发现，冲绳北部野猪的JEV阳性血清样本比例很高，但他们怀疑这些样本是由JEV感染的，JEV在养猪场中被放大，那里有更稳定的未感染宿主供应。截至 2022 年，冲绳有 219 个养猪场，总人口为 211,700 头猪，但我们无法确定接种 JEV 疫苗的百分比。此外，岛上还存在未知的野猪种群。Komiya等人[24]发现，即使在冬季，日本石川县野猪的JEV中和抗体和21.6%的IgM抗体（提示近期感染）的比率也很高（86.5%，n = 37），因此有必要对这些野生动物宿主中的JEV状况进行更多研究。

在我们的研究中，2016年收集的蚊子数量最多。然而，这受到蚊子磁铁（MM）使用的影响。2016年，MM与被动箱式陷阱一起在同一地点部署了22周（154个陷阱夜）。在此期间，MM捕获了7,215只雌性蚊子，而PBT捕获了1,661只。2016年后，由于疏水阀故障和无法获得维修服务，我们停止使用MM。

当考虑所有诱捕器类型时，蚊子总丰度在诱捕地点之间均匀分布。然而，当仅过滤被动箱式捕猎器的数据时，在每个收集点观察到蚊子物种多样性和丰度的异质性。地点1，大隈海滩，似乎有利于亚洲虎蚊Ae的种群。白纹，总体丰度最大（表3），而地点2汉森似乎更适合两种Ae。白纹鱼和Cx的成员。西蒂恩斯情结。阿。Subalbatus蚊子经常在嘉手纳弹药靶场的Site 3被捕获，但在其他地点没有，在Kinser的Site 4捕获了各种蚊子，但总体丰度较低。Ae的丰度更大。地点1的白叶树可能是因为它靠近构成山原国家公园的常绿阔叶林。最丰富的Ar。Subalbatus在嘉手纳AB的Site 3被捕获。沃尔特·里德生物系统学单元（WRBU.si.edu）描述了Ar。Subalbatus“最初与森林有关”，并且“在农村和郊区蓬勃发展”。在Site 4捕获的蚊子的总体匮乏似乎与密集的城市化或“建成”条件密切相关，这些条件可能提供更少的产卵区域。

目前，日本的疫苗接种覆盖率很高。1954年，日本将小鼠脑源性JEV疫苗添加到常规的儿童免疫计划中，但由于担心潜在的副作用，于2005年停止了该建议。可以理解的是，疫苗接种覆盖率急剧下降，直到2009年一种新的Vero细胞衍生疫苗被批准使用，日本在2010年恢复了该建议[25]。2006年，3-4岁儿童接种JEV疫苗的目标人群比例降至4.0%，但在2009年攀升至61.2%，2020年，日本厚生劳动省报告第一剂疫苗的覆盖率为119.1%。（https://www.mhlw.go.jp/topics/bcg/other/5.html）（即2020年的目标人口为939,000名儿童，但1,118,107名儿童1圣接种了JEV疫苗的剂量）。因此，与前几年使用灭活小鼠脑源疫苗相比，2005年至2015年间儿童期发病的乙脑感染率更高[25]，这表明在乙脑仍然流行的地区普遍接种儿童疫苗的重要性。

我们的研究有几个局限性。2020 年，COVID-19 导致旅行限制并阻止访问我们的 CO2供应商。我们研究的另一个限制是缺乏陷阱多样性。为了进行比较，在整个研究中始终如一地使用蚊子磁铁和Reiter/Cummings引力，Biogents Gravid自杀陷阱将提供额外的见解。此外，均质化的蚊子样品在室温（24°C）下在缓冲液AVL中保存长达7天，以便包装并运送到玛希隆大学。认识到RNA降解的可能性，我们的团队开发了一种质量保证流程，使用阳性和阴性能力分析物测试轮次（对实验室人员不知情）包含在现场样品中。迄今为止，经历相同包装和运输协议的阳性对照表明样品保持完整性。最后，我们无法从国内养猪场收集血清样本来评估JEV血清阳性。

总之，我们在 2016 年至 2021 年间收集的任何蚊子中都没有检测到 JEV。而且，除了Cx。sitiens，我们观察到历史上已知作为JEV载体的一些蚊子的数量减少。但是，仅根据这些数据，我们无法确定JEV是否已从冲绳中消除。例如，Chen等人[26]证明了通过Ar传播JEV的潜力。Subalbatus位于没有水稻种植的地方。土地利用（以及随后的蚊子栖息地）、气候变化以及人类和动物的JEV疫苗接种的变化都在破坏或促进JEV传播循环方面发挥着重要作用。未来的研究应着眼于家猪，野猪以及苍鹭和其他涉禽的JEV血清阳性水平，以及Ar的潜在作用。冲绳岛上JEV传输周期中的亚白鲸。

支持信息

本研究中使用的陷阱。

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S1 图 本研究中使用的陷阱。

A–蚊子磁铁;B–被动箱式疏水阀;C-生物制剂自杀陷阱;D-赖特/卡明斯引力陷阱。所有照片均由作者Mark F. Olson博士拍摄。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422.s001

（提夫）

S2 图 每个诱捕地点的土地利用随时间的变化。

A = 显示陷阱位置的卫星图像。内容是 Esri 的知识产权，经许可在此使用。版权所有 2023 Esri 及其许可方。保留所有权利。B = 2015 年左右的土地利用。C = 2019年左右的土地利用。D = 2020年左右的土地利用（最新版本）。（资料来源：ALOS-先进陆地观测卫星，研究和应用项目;https://www.eorc.jaxa.jp/ALOS/en/dataset/lulc_e.htm;内容是日本宇宙航空研究开发机构（JAXA）的知识产权，经许可在此使用）。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422.s002

（提夫）

S1 表。 CSV文件包含本研究结果的基础数据。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011422.s003

（中新社）

确认

我们要感谢冲绳县政府和琉球大学的专业知识和合作。此外，我们感谢Gabriel Hamer博士，Craig Stoops博士和George Cooksey上尉的审查和改进手稿的宝贵建议。我们还要感谢嘉手纳空军基地第 18 联队公共事务办公室在出版前筛选这份手稿以确保运营安全 （OPSEC）。

引用

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