《免费医学论文发表--蛇和露天市场：摩洛哥马拉喀什市场与爬行动物相关的人畜共患病原体》期刊简介
免费医学论文发表--蛇和露天市场：摩洛哥马拉喀什市场与爬行动物相关的人畜共患病原体
抽象
世界着名的马拉喀什市场，在阿拉伯语中也被称为露天市场，拥有各种各样的爬行动物，这些爬行动物用于药用/魔法/宠物目的或用于耍蛇。考虑到人类、爬行动物和人畜共患病原体的相互作用，从未研究过这种独特的流行病学背景。因此，本研究的目的是确定与马拉喀什市场上处理的爬行动物相关的血液和粪便中存在的寄生虫和病原体，以评估爬行动物 - 人类界面内的人畜共患传播风险。对来自供应商或耍蛇人的私人爬行动物（n = 118）进行了检查，并对血液和粪便进行了采样。提取DNA并进行分子筛选（cPCR，nPCR，qPCR，dqPCR），旨在鉴定潜在的人畜共患病原体（即无形体/埃立克体属，立克次体属，伯氏疏螺旋体，贝氏柯克斯体，巴贝虫/泰勒氏菌属，隐孢子虫属，贾第鞭毛虫属，利什曼原虫塞斯托达）。总体而言，28.9%（34/118）的爬行动物对至少一种病原体呈阳性。在血液中，在四条蛇中检测到无形体属，其中两条蒙彼利埃蛇的无形体吞噬细胞阳性，而在一条地中海变色龙和四条泡芙加法器中检测到立克次体属。在地中海变色龙和蒙彼利埃蛇中发现了利什曼原虫。在粪便中，cox1基因产生了无数的线虫、绦虫、真菌和细菌序列。重要的是，普通变形杆菌是从地中海变色龙中鉴定出来的。隐孢子虫属nPCR从摩洛哥蠕虫蜥蜴以及埃及眼镜蛇中的铜绿假单胞菌和粉扑加法器中产生阳性样本（即基因型为I型的隐孢子虫属）。这项研究的结果表明，爬行动物的血液和粪便中存在的微生物和寄生虫存在人畜共患传播的风险，这些爬行动物被带到摩洛哥马拉喀什的露天市场，用于药用目的或用于迷人的蛇，与人类直接接触。
作者摘要
举世闻名的马拉喀什露天市场（Marrakech souks）是一个独特且很少被研究的环境，爬行动物经常与人类接触，并用于传统医学或古老的耍蛇工艺。因此，我们旨在鉴定马拉喀什市场上饲养的爬行动物血液和粪便中存在的病原体，以评估人畜共患风险。对供应商或耍蛇人的动物进行了采样。提取DNA并进行分子筛选以鉴定潜在的人畜共患病原体。总体而言，28.9%的爬行动物对至少一种病原体呈阳性。重要的是，我们从四条蛇中检测到无形体属，从地中海变色龙和泡芙加法器中检测到立克次体属，从蛇和变色龙中检测到利什曼原虫。另一方面，从地中海变色龙中鉴定出普通变形杆菌等人畜共患细菌，埃及眼镜蛇的铜绿假单胞菌和粉扑加法器的摩根氏菌。因此，鉴于与人类的不断接触，保存在马拉喀什露天市场的爬行动物可能在病原体和寄生虫的人畜共患传播中发挥作用。
数字
Fig 5Fig 6Table 3图1图2表1Fig 3Fig 4Table 2Fig 5Fig 6Table 3图1图2表1
引文： 门多萨-罗尔丹 JA、诺尔·卢扎达-弗洛雷斯五世、勒库奇 N、胡奇菲一世、安诺西亚 G、扎泰利 A 等人 （2023） 蛇和露天市场：与摩洛哥马拉喀什市场爬行动物相关的人畜共患病原体。公共科学图书馆 Negl Trop Dis 17（7）： e0011431. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011431
编辑 器： 刘海辉，香港大学，中国
收到： 1年2023月4日;接受： 2023 年 19 月 2023 日;发表： <>月 <>， <>
版权所有： ? 2023 门多萨-罗尔丹等人。这是一篇根据知识共享署名许可条款分发的开放获取文章，该许可允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。
数据可用性： 本研究中生成的分子数据存放在Genbank数据库中：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/，入藏号如下：OQ633057至OQ633061为gltA;OQ630499 OQ630503 16S rRNA;OQ632771 OQ632773 18S rRNA;OQ672452，OQ695490和OQ695491 cox1和18S rRNA。
资助：D.O.和J.A.M.R.在以下方案的框架内进行了这项研究：下一代欧盟-MUR PNRR新发传染病扩展伙伴关系倡议（项目编号：NEXT EU-MUR PNRR 新发传染病扩展伙伴关系倡议）。PE00000007，INF-ACT）。资助者在研究设计、数据收集和分析、发表决定或手稿准备方面没有任何作用。
竞争利益： 提交人声明不存在相互竞争的利益。
介绍
露天市场是一个阿拉伯语术语，意思是“市场”，在北非和中东，它是一个重要的中心，不仅是商业，而且是阿拉伯伊斯兰社会的传统和文化[1]。这些重要市场的起源被认为与伊斯兰社会的演变和扩散密切相关。尽管如此，古代露天市场的考古文献很少，但露天市场的记录可以追溯到公元前3000年的安纳托利亚波斯[2]。在摩洛哥，马拉喀什露天市场代表了最大和最著名的市场，近年来不仅成为马拉喀什商业，贸易和艺术的中心，而且成为重要的旅游热点[3]。马拉喀什的老城区或麦地那集中了最多的露天市场，靠近神秘的Jemaa-El-Fna广场（也称为Jama-El-Fna或Djemaa-El-Fna广场;字面意思是：艺术的十字路口）。这个神秘的广场始建于11千世纪，从那时起，这是一个非常复杂的空间，涉及摩洛哥传统，通过艺术，宗教，音乐和美食展示。鉴于其露天市场及其文化遗产，该市两次被联合国教科文组织指定为世界遗产，马拉喀什已成为摩洛哥和北非最著名的旅游目的地之一[4]。在Jemaa-El-Fna广场内，猴子和蛇的存在很常见[3]。当然，尽管露天市场具有魅力和旅游吸引力，但仍存在剥削野生动物的风险[5,6]。具体而言，关于爬行动物在马拉喀什露天市场的存在，它们的使用与药用目的或耍蛇有关[6,7]。事实上，马拉喀什麦地那的露天市场充满了活的爬行动物，主要是刺腿陆龟（Testudo graeca），地中海变色龙（Chamaeleo chamaeleon），偶尔还有贝尔的Dabb巨蜥（Uromastyx acanthinura）和沙漠蜥蜴（Varanus griseus），它们用于传统医学和魔法等动物学目的[7].同样，动物解剖学作品也被商业化，目的相同，如沙漠蜥蜴，尼罗河鳄鱼（Crocodylus niloticus）和非洲岩蟒（Python sebae），这两个物种都是摩洛哥的外来物种，以及埃及眼镜蛇（Naja haje）的头部，存在于马拉喀什的露天市场[6].另一方面，蛇迷仍然是摩洛哥大城市的普遍工艺，马拉喀什是该国这项活动的主要中心，自1700年代后期以来就描述了它的存在[8]。蛇迷主要是由一个名为Aissawa的宗教兄弟会实践的，他们声称对蛇的毒液免疫。在Jemaa-El-Fna广场上，常用的蛇族是埃及眼镜蛇和泡芙加法器（Bitis arietans），其次是角蝮蛇（Cerastes cerates）和摩尔蝰蛇（Daboia mauritanica）。轻度至无毒的物种也被使用，例如蒙彼利埃蛇（Malpolon monspessulanus），在较小程度上使用马蹄鞭蛇（Hemorrhois hippocrepis）[8]。魅力者使用的蛇通常被捕获（从27月到8月），并从摩洛哥西南部的大西洋带带到马拉喀什的露天市场，那里的蛇种（超过5种）茁壮成长[<>]。露天市场内动物的整体福利、饲养和生活条件很少。动物被关在拥挤的笼子里，没有水，通常被自己的粪便包围[<>]。
这些不卫生的条件，加上不断的处理和与人的接近，是人畜共患病原体传播的驱动因素。事实上，在这种情况下，人类可能会接触到爬行动物传播的病原体和爬行动物媒介传播的疾病（RBVDs），因为它们距离很近，并且相互作用不断[9,10]。在各种传播途径中，环境污染或口腔-粪便传播病原体通过爬行动物处理感染人类的可能性更大。除沙门氏菌外，还有许多其他细菌和寄生虫也可传播[9,11]。然而，没有研究评估与人类爬行动物界面相关的这些病原体的流行率。此外，与爬行动物相关的其他人畜共患病原体（例如无形体、疏螺旋体、立克次体）通过媒介（即蚊子、蜱虫和沙蝇）传播[10]。先前对摩洛哥爬行动物的研究已经解决了沙门氏菌[12]和陆龟的蜱[13]，以及嗜爬行动物沙蝇的种类及其在利什曼病传播中的潜在作用[14]。此外，已经对与摩洛哥爬行动物相关的肝虫（如肝虫属）的患病率和分布进行了生态学研究[15,16]，或关于爬行动物特有物种寄生动物群的患病率[17]。相反，没有研究解决马拉喀什露天市场的人类 - 爬行动物 - 寄生虫界面，也没有研究与高度处理的动物（如魅力者使用的蛇）相关的人畜共患病原体。
因此，本研究的目的是鉴定保存在Jemaa-El-Fna广场的爬行动物（即蜥蜴，和蛇）的血液和粪便中存在的微生物和寄生虫，以评估人畜共患病原体的流行率。
方法
道德声明
该研究是根据所有适用的国际、国家和/或机构动物护理和使用指南进行的。爬行动物采样协议由摩洛哥王国国家食品生产安全卫生局授权（批准号23355ONSSA/DIL/DPIV/2022）。
动物检查和取样
2022年1月，对马拉喀什Jeema-El-Fna广场附近的爬行动物（图18）进行了检查，使用参考键或清单对物种水平进行了形态鉴定[20-1]，并在其所有者（即供应商或耍蛇人;图2）。从每只动物身上获得血液样本（图100）。使用腹侧尾骨静脉从蛇和蜥蜴中提取血液（~1μl至1ml），而的血液从甲下窦抽取。血液在Whatman FTA卡和5.20ml Eppendorf管中分离，后来储存在-20°C。 对所有动物进行泄殖腔拭子并储存在-21°C。 对所有动物进行血涂片检查，然后使用Diff-Quik染色[22]评估是否存在血液寄生虫[2]。涂片用自来水冲洗以去除多余的污渍，然后使用光学显微镜进行评估（徕卡DM LB<>，德国）。
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图1. 摩洛哥马拉喀什Jemaa-El-Fna广场地图。
蓝色圆圈代表马拉喀什市;黄色圆圈表示显示魅力者使用的蛇的地点，供应商出售爬行动物的地点由红色圆圈表示。使用 QGIS 软件准备的地图 - 布宜诺斯艾利斯版本（XYZ 切片的链接：https://tile.openstreetmap.org）。
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图2. 从（a）埃及眼镜蛇（Naja haje）和（b）puff adder（Bitis arietans）的腹侧尾骨静脉抽血。
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病原体的分子筛选
根据制造商的说明，使用商业试剂盒（QIAamp DNA Mini Kit，Qiagen，Hilden，德国）从单个血液样本（n = 112）和泄殖腔拭子（n = 102）中提取DNA，并分析以检测不同的微生物和寄生虫（见下文）。有关cPCR和qPCR方案的详细信息见表1。所有cPCR产物均在用GelRed染色的2%琼脂糖凝胶（VWR国际PBI，意大利米兰）上检测，并在GelLogic 100凝胶记录系统（柯达，纽约，美国）上可视化。然后使用与PCR相同的引物在3基因分析仪（应用生物系统，美国加利福尼亚州福斯特城）中使用与PCR相同的引物在两个方向上纯化和测序扩增子。使用Geneious软件版本1.3130（Biomatters Ltd.，奥克兰，新西兰）[9]编辑和分析序列，并通过基本局部比对搜索工具（BLAST;http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）用于物种鉴定。对贾第鞭毛虫属和隐孢子虫属进行巢式PCR分析如下。对于贾第鞭毛虫，使用巢式PCR扩增部分磷酸异构酶（0bp）基因来检测所有已知的组合[23,532]。另一种nPCR用于检测隐孢子虫属，靶向24S rRNA基因的片段[25]。
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表 1. 本研究中通过常规（c）和定量（q）PCR筛选病原体，包括靶基因，引物，探针核苷酸序列和片段长度。
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系统发育分析
使用MEGA16软件中的ClustalW应用程序，将来自无形体属的立克次体gltA和7S rRNA序列分别与GenBank数据库中提供的密切相关物种进行比对[37]。使用MEGA7中的赤池信息标准（AIC）选项来建立适合每个序列比对的最佳核苷酸替代模型。具有不变位点（I）[38]的Tamura-Nei模型用于生成gltA和16S rRNA树。最大似然 （ML） 系统发育推断与 2000 次自举重复一起使用，以在 MEGA7 中生成系统发育树。立克次氏体的同源序列被用作树根的外群，包括来自贝氏立克次体和加拿大立克次氏体（AB297809）的gltA序列，以及帕氏立克次氏体（NR16）的118776S序列。
结果
爬行动物检查和取样
总共检查和筛选了118个爬行动物标本，代表两个目[Squamata（两栖动物具有2种，Sauria具有3科68种，Ophidia具有2科4种）和Testudines（<>种）;表 <>.市场上商业化的爬行动物种类来自Amphisbaenia，Sauria和Testudines（图<>）。此外，还筛选了<>个由魅力者使用的蛇标本，主要以蒙彼利埃蛇为代表，其次是泡芙蛇、埃及眼镜蛇、东蒙彼利埃蛇和马蹄鞭蛇<>个（表<>）。前面提到的两个物种被认为是剧毒的（即泡芙加德，埃及眼镜蛇），而两种Malpolon都被认为是轻度毒的后牙（即后牙）蛇。相反，马蹄鞭蛇是一种无毒的蛇（图<>）。
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图3. 在马拉喀什露天市场商业化的爬行动物，a）成年地中海变色龙（Chamaeleo chamaeleo），b）新生的地中海变色龙，c）刺腿陆龟（Testudo graeca），d）埃及眼镜蛇（Naja haje）干头。
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图4. 魔术师在Jemaa-El-Fna广场使用的蛇。
a）粉扑加法器，b）处理粉扑加法器的魅力者，c）与蒙彼利埃蛇（Malpolon monspessulanus）的魅力者，d）带有埃及眼镜蛇的魅力者。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011431.g004
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表 2. 采样的爬行动物种类（学名和通用名称）以及所有者的数量和类型。
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病原体检测
血涂片阳性观察显示，22%的受检个体存在血腥配子细胞（26/118;图5）。仅在五种蛇中观察到Gamonts（表3）。总体而言，28.9%（34/118）的检查爬行动物对至少一种分子鉴定的病原体呈阳性，其中9.3%（11/118）是供应商拥有的动物，19.5%（23/118）是魅力者使用的蛇。对血液中病原体的分子筛查显示无形体/埃立克体属、立克次体属（gltA）、巴贝氏体/泰勒氏体属和利什曼原虫属（ITS）呈阳性结果（表3），而所有样本均呈阴性，而所有样本均呈阴性，伯氏疏螺旋体、斑疹热组立克次体或贝氏柯克斯体。具体而言，四条蛇（3.4%）对土耳其马的无形体亲噬细胞呈阳性（即与MT99的核苷酸同一性为7.126499%）。所有生成的无形体属序列聚集在无形体物种内（A.吞噬细胞，无形体，无形体odocoilei），具有高自举值（即87%）（图6A）。另一方面，16S rRNA靶基因也在内共生体念珠菌米迪氯氏线粒体（100.00%核苷酸同一性与Cimex lectularius EU780455）的泡芙加法器中扩增。此外，4.2%的爬行动物（5/118;四个泡芙加器和一个地中海变色龙）对立克次氏体属呈阳性。97个粉扑加法器对亚洲立克次体呈阳性（与AP7同源性为019563.100%），地中海变色龙对念珠菌呈阳性（923743%核苷酸与MK6的犬栉头孢子虫同源性）。系统发育推断将来自 puff adders 的立克次体属与 Rickettsia helvetica 聚集在一起，而来自地中海变色龙的立克次氏体属序列与 R 聚集在一起。asembonensis、felis立克次体和塞内加尔念珠菌（图99B）。此外，尽管血涂片患病率很高，但地中海变色龙、蒙彼利埃蛇和粉扑加法器（9.696565%核苷酸与KC3的同一性）中仅获得了三个肝动物属序列，以前在北非的Psammophis schokari蛇中检测到（表1）。此外，dqPCR检测到两只对利什曼原虫呈阳性的动物（7.35%），即地中海变色龙（ct 31.34）和蒙彼利埃蛇（ct 56.<>）。
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图5. 蛇的红细胞中血腥的配子细胞。
a）puff adder红细胞中的gamonts，b）马蹄鞭蛇（Hemorrhois hippocrepis）红细胞中的gamonts，c）蒙彼利埃蛇红细胞中的gamonts，d）埃及眼镜蛇红细胞中的gamonts。比例尺50μm。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011431.g005
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图6. 无形体科（a）16S rRNA序列和立克次氏立克次体属gltA（b）基因的最大似然系统发育树。引导值 （>40%） 显示在节点附近。
帕氏立克次体（a）贝氏立克次体，加拿大立克次体（b）被用作外群。 比例尺表示每个位点的核苷酸取代。本研究的顺序以粗体显示。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011431.g006
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表 3. 通过血涂片或分子鉴定在爬行动物中检测到的媒介传播病原体和口腔粪便病原体。
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011431.t003
相反，粪便中病原体的分子筛查显示多种药物的阳性结果。特别是，用cox1基因获得了无数的序列，从线虫和绦虫到真菌和细菌。在八条（6.7%）刺大腿陆龟和两条（1.7%）蒙彼利埃蛇中检测到线虫。生成的序列与肠虫属（HQ83属）、Syphacia属（MH89属）和锥虫属（KJ317434属）相似（427272%至939328%）。此外，从以中头蛇（MH463505）和穿透头蛇（KR780799）属（核苷酸身份的83%）为代表的两条蛇（蒙彼利埃蛇东部和蒙彼利埃蛇）中检索到绯头蛇序列。相反，在地中海变色龙的两条蛇（puff adder和东蒙彼利埃蛇）和普通变形杆菌（CP498478;92%核苷酸特性）中检测到神经孢子菌（KY054157;核苷酸特性的92%）。
最后，隐孢子虫属18S rRNA基因nPCR显示一只摩洛哥蠕虫蜥蜴基因I型（MH912997;核苷酸身份的92%）阳性样本。此外，nPCR 对一条埃及眼镜蛇中的铜绿假单胞菌（CP050335;99.5% 的核苷酸身份）和摩根氏菌 （CP032295;CP064828;98.5%的核苷酸身份）在一个泡芙加器和一条蒙彼利埃蛇中。此外，在埃及眼镜蛇中检测到真菌（Diutina catenulate-MK394156;99.8%的核苷酸身份）。本文生成的代表性序列存放在GenBank（入藏号OQ633057至OQ633061用于gltA;OQ630499 OQ630503 16S rRNA;OQ632771 OQ632773 18S rRNA;OQ672452，OQ695490和OQ695491用于cox1和18S rRNA）。
讨论
从被带到马拉喀什Jemaa-El-Fna广场露天市场的爬行动物中检测到各种各样的微生物和寄生虫。重要的是，虽然一些已鉴定的寄生虫是爬行动物的特异性并且是非致病性的（即肝动物），但检测到的许多细菌，真菌和寄生虫具有人畜共患的潜力。数据表明，存在与爬行动物相关的媒介传播（例如无形体、立克次体、利什曼原虫）以及口腔传播的人畜共患病原体（即隐孢子虫、假单胞菌、摩根氏菌和迪乌蒂纳），因此对马拉喀什露天市场的供应商和魅力者构成感染风险。
总体而言，检查的118个爬行动物标本公平地代表了与传统医学，魔法和蛇迷人实践相关的典型摩洛哥爬行动物[5]。正如在以前的研究中观察到的，地中海变色龙和刺腿陆龟在市场上大量商业化，从野外大量捕获[39,40]，而摩洛哥蠕虫蜥蜴在这种情况下很少见[6]。事实上，先前的研究表明，变色龙和陆龟野生种群的主要威胁之一是非商业性收集，这在摩洛哥似乎是一种常见的活动[40]。从这个意义上说，许多露天市场日间购买者购买变色龙，特别是（即，55%的摩洛哥人口家中有），作为宠物饲养[40,41]。同样，魅力者使用的蛇种也以常见且更具吸引力的物种为代表，特别是埃及眼镜蛇，由于其独特的警告行为表现，被认为是最有利可图的物种[7,8]。此外，泡芙加法器和Malpolon的种类也被广泛使用，是蒙彼利埃蛇（虽然有轻微的毒性）交给游客拍照[7]。考虑到供应商和耍蛇人，后者是一个研究不足的工作类别，面临风险，因为蛇咬伤的可能性是一种被忽视的热带疾病，每年影响超过2万人，导致多达7,138人死亡，并留下超过000,400名残疾人[000]。在摩洛哥，蛇咬伤是一个重要的公共卫生问题，主要发生在中部地区。然而，研究表明，高达42%的蛇咬伤是由毒蛇或疣蛇引起的，在农村地区由雄性蛇咬伤[86-43]。尽管经常与有毒动物接触，但魅力者蛇咬伤中毒的报道似乎不足，最有可能的是，如果魅力者报告蛇咬伤，他们可能会失去生计[45,8]。此外，这项研究首次筛选爬行动物中经常与人类接触的微生物和寄生虫，在许多情况下在不卫生的条件下，有利于人畜共患病原体的传播[46]。事实上，分子筛查不仅可以识别可通过环境/口腔污染传播的病原体[5]，还可以识别通过媒介传播的病原体[9]，以及可能引起人畜共患问题的真菌和细菌，这突出了在人为环境中对野生动物进行分子筛查的重要性。
血腥（很可能是肝动物）的细胞学和分子鉴定与之前在地中海盆地同一地理区域进行的研究一致[47]。事实上，北非蛇的肝动物感染很常见，这项研究的结果显示，与之前报道的全球患病率22%相比，感染率更高（8%）[47]。然而，即使Hepatozoon spp.被认为是非致病性的，与人畜共患的相关性无关，也鼓励进一步的生态学研究，以更好地了解血腥物种的传播及其在爬行动物中的传播途径。相反，无形体的分子检测，主要是A。嗜吞噬细胞强调了爬行动物（尤其是蛇）作为粒细胞无形体病病原体扩增库的潜在作用[10]。事实上，在其他生态情景（即美国北加州）中，发现蛇对人类来源的A呈PCR阳性。嗜吞噬细胞[48]。在摩洛哥，A.嗜吞噬细胞在犬科、小反刍动物和人类人群中普遍存在，主要分布在北部地区[49-51]，但摩洛哥疣蛇中无形体的分子阳性性是前所未有的发现。这些动物是从野外捕获的，再加上在粉扑加法器中发现的念珠菌米迪氯亚线粒体内共生体，表明暴露于可能传播无形体的蜱虫。事实上，线粒体念珠菌可用于脊椎动物宿主，以评估蜱暴露情况[52]。此外，这是爬行动物中Midichloria线粒体念珠菌的首次分子鉴定。此外，对立克次体属的分子检测证明了野生爬行动物蜱暴露的证据，如之前在地中海盆地[53]以及新热带[54]，非洲和亚洲[55]中检测到的那样。在脊椎动物宿主血液中对立克次体属的分子鉴定并不常见，但本文报道的立克次体属的患病率（4.1%）高于先前的研究（即3.1%），在地中海北部盆地[53]。因此，考虑到摩洛哥从家畜和环境的蜱虫中检测到43种致病性立克次体，需要进一步的研究来评估与爬行动物相关的蜱虫中致病性立克次体的患病率[56]。此外，考虑到在摩洛哥的硬蜱[53]以及与蜥蜴相关的相同种类的蜱虫[<>]中检测到了单千次立克次体，因此提倡对野生捕获的爬行动物进行蜱虫调查，以评估病原性立克次体病媒传播的风险。
媒介传播的原生动物L.本文首次在地中海变色龙和蒙彼利埃蛇中发现了tarentolae，进一步表明这种与爬行动物相关的利什曼原虫在整个地中海盆地广泛分布。事实上，以前的研究确定了L.来自蜥蜴和壁虎的塔伦托拉[57]，以及本文提供的数据表明，蛇也可能是称职的宿主。此外，这种利什曼原虫种属的媒介Sergentomyia minuta在摩洛哥具有广泛的地理分布，主要分布在内脏和皮肤利什曼病流行的北部和中部地区[14]。此外，S的亲人摄食行为的证据。细枝末节[58]，以及哺乳动物（人类和犬科动物）暴露于L。塔伦托拉[59,60]，加上摩洛哥不同种类的利什曼原虫的同源性发生（L.婴儿，L.少校，L.塔伦托拉，L.热带）[61]，使该国皮肤和内脏利什曼病的流行病学情况进一步复杂化。因此，有必要进行流行病学调查，评估利什曼原虫在沙蝇、哺乳动物和爬行动物宿主中的流行情况，以阐明利什曼原虫属的真实状况和相互作用，以及以前认为的非许可宿主和媒介中可能的感染。
另一方面，本文对粪便拭子进行的分子筛选不仅能够检测目标寄生虫（即，绦虫、线虫、原生动物），而且还允许鉴定致病细菌和真菌。尽管如此，爬行动物的共生学调查被进一步提倡对寄生虫进行完整的形态分子鉴定。事实上，本文产生的线虫序列具有低核苷酸特性，这仅允许将这些寄生虫鉴定到家族水平（即Oxyuridae），其中大多数是爬行动物的非致病特异性，除了肠虫属。重要的是，尽管本文产生的来自刺大腿陆龟的蠕虫肠杆菌序列与人类来源的E具有92%的核苷酸同一性。来自希腊的蚯蚓，先前的研究在阿尔及利亚的同一陆龟物种中发现了这种人类蚯蚓物种[62]。因此，在露天市场背景下，陆龟可能是人类氧化尿感染的潜在来源，因此应进行监测[63]。此外，除了爬行动物特异性到低致病性绯头虫和无害真菌外，P.普通是从露天市场的地中海变色龙中发现的。由于该物种用于药用/魔法目的，或作为宠物，因此存在潜在致病性食源性P。寻常型突出了人畜共患感染的风险[64,65]。革兰氏阴性菌如P的鉴定。爬行动物中的寻常是泄殖腔的常见发现，因为爬行动物是这种潜在人畜共患病原体的健康携带者和传播者[65]。
最后，隐孢子虫属18S rRNA序列分析不仅揭示了保存在小型市场摊位上的摩洛哥蠕虫蜥蜴的一种隐孢子虫，还揭示了致病细菌和真菌。人畜共患隐孢子虫属（即C.穆里斯，C.帕尔武姆，C.泰泽里）可见于摄入感染啮齿动物的蛇[66]。蚜虫没有被感染，但它们可能会排泄摄入的卵囊，污染环境。相反，在摩洛哥蠕虫蜥蜴等食虫爬行动物中检测到啮齿动物基因型的隐孢子虫，可能表明在野外或市场环境中存在真正的感染或自然暴露[67]。另一种选择是通过昆虫摄入进行污染，正如感染C的宠物豹壁虎所建议的那样。小卵囊，经证实可由携带传染性卵囊的苍蝇机械传播[67,68]。然而，隐孢子虫基因型I.的致病性仍然未知[69]。用隐孢子虫nPCR鉴定的细菌和真菌都具有潜在的人畜共患疾病，因此对耍蛇人和游客构成了特别的风险。例如，需氧和兼性细菌种类，如P。铜绿假单胞菌对蛇和人类都有潜在的致病性[70]。同样，摩根摩根菌常见于蛇的泄殖腔和口腔[71]。因此，毒蛇或无毒蛇咬伤不仅本身就存在潜在的危及生命的风险，而且还是继发细菌感染的途径。另一方面，致病酵母如D。从一种轻度毒的蒙彼利埃蛇中分离出来，对耍蛇人和处理这种蛇的游客来说是一种潜在的风险。这种真菌以前称为卡氏念珠菌，与人类和动物的浅表和侵袭性感染有关[72]。
结论
本文提供的数据强调了与摩洛哥马拉喀什Jemaa-El-Fna广场露天市场保存、处理和使用的爬行动物相关的寄生虫、细菌和真菌感染人畜共患疾病的潜在风险。事实上，为药用目的出售或用于耍蛇的爬行动物，因此与人类直接和持续接触，含有人畜共患和致病剂，例如属于无形体属、立克次体属、隐孢子虫属、假单胞菌属、摩根氏菌属和 Diutina 属的病原体，它们可能通过媒介、口服甚至蛇咬伤传播。因此，处理这些蛇的耍蛇人有被污染的风险。因此，提倡在“同一个健康”方法下进行研究，以更好地了解在马拉喀什迷人的露天市场这一独特背景下潜在共享病原体的流行、发生和流行病学周期。
确认
作者要感谢供应商耍蛇人，以及当地社区的支持并使这项研究成为可能。
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