厦门论文发表-中国南部海南岛擦洗斑疹伤寒患者与细菌基因型和临床特征相关的基因组细菌载量

抽象

磨砂斑疹伤寒，由螨虫传播的东方椿（O.津岳），是亚太地区的主要发热性疾病。O.先前发现血液中的Tsutsugamushi在致死性疾病患者中明显高于非致命性疾病患者，并且与病程，焦痂的存在和肝酶水平相关。在这项前瞻性观察研究中，我们使用靶向O的56 kDa TSA基因的实时PCR分析了细菌DNA载量与临床特征，疾病严重程度和基因型的关联。117名未接受适当抗生素治疗的恙虫病幸存患者的血液样本中的Tsutsugamushi。中位数 O.津岳木DNA载量为3.11×103拷贝/毫升（范围，44 至 3.3×106拷贝/毫升）。根据功能障碍器官的数量，将患者的严重程度分为轻度、中度和重度，O差异无统计学意义。津岳木在这些群体中发现了DNA载量。感染卡普组的患者表现出显着更高的O。津岳木DNA载量高于吉列姆（P < 0.05）和TA763（P < 0.01）组。黎族患者的DNA载量明显高于汉族患者。患者的血细菌DNA载量在按性别，年龄，有或没有焦痂或疾病发病季节划分的组之间没有显着差异。发热时记录的最高体温与O呈正相关。津岳木DNA载量（ρ = 0.272，P = 0.022）。相关性分析表明，血清总胆红素水平与O呈正相关。津岳木脱氧核糖核酸载量。总之，这项研究的结果证明了O的DNA载量与关联。中国海南恙虫病患者的严重程度和基因型。

作者摘要

高基因组DNA载量是病原体毒力的标志物，与细菌性传染病的疾病严重程度有关。最近的研究表明，非存活的斑疹伤寒患者的细菌负荷明显高于存活患者，并且病程、焦痂的存在和肝酶水平与O呈正相关。津岳木来自泰国东北部和韩国的患者的DNA负荷。然而，恙虫病的严重程度和死亡率在很大程度上显示出地理差异。为了进一步分析存活患者基因组DNA载量与严重程度的关联，O.评估了中国海南恙虫病患者血液样本中的tsutsugamushi基因组负荷。结果表明，O.津岳木DNA载量与基因型、患者种族、发烧时记录的最高体温和血液中的总胆红素（TBil）有关。然而，O.津岳木在轻度、中度和重度患者群体之间发现 DNA 载量，在有或没有焦痂的患者组之间也发现 DNA 载量。本研究有助于更好地了解O的致病机制。津冢。

数字

Fig 3Fig 4Table 2图1表1图2Fig 3Fig 4Table 2图1表1图2

引文： 王刚， 福瑞， 张磊， 薛林， 阿尔-马赫迪 AY， 谢旭， 等. （2023） 中国南部海南岛恙虫病患者与细菌基因型和临床特征相关的基因组细菌负荷。公共科学图书馆 Negl Trop Dis 17（4）： e0011243. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243

编辑 器： Manisha Biswal，印度医学教育与研究研究生院

收到： 6 年 2022 月 14 日;接受： 2023月 21， 2023;发表： <>月 <>， <>

版权所有： ? 2023 王等这是一篇根据知识共享署名许可条款分发的开放获取文章，该许可允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。

数据可用性： 本研究期间分析的所有序列均可从NCBI数据库获得（GenBank入库号ON862382 - ON862498）。

资金： 本研究得到了中国海南省自然科学基金（http://dost.hainan.gov.cn/）资助号820RC628（授予FY），820QN267（授予GW），820QN412（授予MX），821QN258（授予RP），821QN0896（授予YH）和822MS076（授予GW），海南省重点研发计划（http://dost.hainan.gov.cn/）资助号ZDYF2022SHFZ085（授予FY）和ZDYF2022SHFZ098（授予LZ），海南省教育厅（http://edu.hainan.gov.cn/）资助号Hnky021-40（授予CT），国家自然科学基金（https://isisn.nsfc.gov.cn/pmpweb/login）资助号82060378（授予FY），81860367（授予FY），热带转化医学教育部重点实验室开放基金， 海南医科大学（https://ttm.hainmc.edu.cn/）批准号2021TTM005（授予LZ），HYPY201919（授予YH），海南省重大科技计划（http://dost.hainan.gov.cn/）批准号ZDKJ202003（授予FY）和ZDKJ2021035（授予CH），海南省临床医学中心（http://wst.hainan.gov.cn/swjw/） QWYH202175 （颁发给MX）以及李万强慈善基金有限公司、李文伟和香港海南商会华南微生物研究基金（授予JF-WC）的捐款。资金来源在研究设计、数据收集、分析、解释或撰写本报告中没有任何作用。

竞争利益： 提交人声明不存在相互竞争的利益。

介绍

东方津嘎木（O.津冢）是一种专性细胞内细菌，可引起螨虫传播的急性发热性疾病擦洗斑疹伤寒，占亚太地区所有发热病例的20%（Tsutsugamushi三角区）。该病在阿拉伯半岛、智利和肯尼亚也有发现，表明其传播范围可能比之前认为的要广泛[1-4]。斑疹伤寒在印度、密克罗尼西亚和马尔代夫广泛再度出现，中国北部和韩国迅速出现病例，在流行国家引起了相当多的关注[5，6]。恙虫病最常见的临床特征是接种受感染的幼虫螨后 7-14 天开始发热和头痛。其他症状包括皮疹、肌痛、咳嗽、淋巴结肿大、恶心、呕吐、腹痛和螨虫咬伤部位焦痂[7-9]。此外，重症病例还报道了多器官衰竭，包括急性肾衰竭、急性呼吸窘迫、脑膜脑炎、心肌炎、脓毒性休克和弥散性血管内凝血[10，11]。未经治疗的病死率为30%-50%，抗生素治疗的病死率为4%[12，13]。O. tsutsugamushi细分为3类：高毒力（Karp，Kato和KN-3血清型），中等毒力（Gilliam血清型）和低毒力（黑木，川崎和KN-2血清型）[14]。尽管恙虫病是一个主要的公共卫生问题，但它在世界范围内仍然是一种被忽视的疾病[5]。

斑疹伤寒的严重程度和死亡率显示出地域差异[13]。这种变异性的基础在很大程度上仍然未知，并且被认为受到多种因素的影响，包括宿主遗传易感性和免疫反应的差异，病原体毒力的变异性和媒介物种。此外，最近的研究调查了O之间的关系。恙虫病的基因组DNA负荷及临床特征.结果表明，致死性疾病患者的细菌载量显著高于非致死性疾病患者，且病程、焦痂存在和肝酶水平与O呈正相关。津岳木DNA载量[15，16]高基因组DNA载量是病原体毒力的标志物，与细菌感染性疾病的疾病严重程度有关。在重度脓毒症中，基因组细菌载量被认为是评估严重程度、预测预后和监测临床反应的有用标志物[17]。结核分枝杆菌复合体（MTBC）细菌载量高的患者在治疗第8周时转化为阴性的比率低于细菌负荷较低的患者，巨噬细胞裂解模型中MTBC分离株的毒力与患者痰液中MTBC DNA载量呈正相关[18，19]. 在脑膜炎球菌病中，脑膜炎奈瑟菌DNA载量越高，死亡风险增加、住院时间延长以及毒性更强的血清型C感染风险增加[20]。

虽然研究已评估斑疹伤寒存活和非存活患者的DNA载量与疾病严重程度的关系，但尚未研究DNA载量与存活患者严重程度之间的关系[15，16]。在这项研究中，O.评估入院时采集的斑疹伤寒患者血液样本中的 tsutsugamushi 基因组负荷，及其与疾病严重程度 O 的关联。分析了津嘎木的基因型和其他临床特征。

方法

道德声明

本研究获得海南医科大学伦理委员会批准。参与这项研究的书面知情同意是从成年患者那里获得的。对于18岁以下的患者，应获得其父母或法定监护人的书面知情同意。

患者招募和病例定义

4年2018月至2021年1月，在海南省37家医院招募了在传染病科就诊的急性未分化热（FUO）患者。这些医院包括海南医科大学附属第一医院、海南医科大学附属第二医院、省会海口市人民医院和位于海南省中部的琼中李苗族自治县人民医院。符合以下标准的患者被纳入本研究：5）腋窝温度≥1.2°C伴有至少3种症状（焦痂、皮疹、淋巴结肿大、肝肿大和/或脾肿大）;<>）症状出现前<>周内有野外暴露史。

入院后立即采集全血和血清样本。使用冷链运输在48小时内将样品运送到实验室，并在测试前储存在-80°C。还收集了入组患者的临床特征和人口统计学特征。

如前所述，擦洗斑疹伤寒严重程度按功能障碍器官数量分组，如前所述，轻度、中度和重度分别对应于无器官功能障碍、单器官功能障碍和双器官或多器官功能障碍[21，22]。简而言之，器官功能障碍的定义如下：1）肺功能障碍：胸部X线检查显示双侧肺阴影，伴有中度或重度缺氧（PaO2/FiO2<250mmHg或PaO2<60mmHg或SpO2<90%）或机械通气需求，2）心血管功能障碍：尽管进行了液体复苏或严重贫血（血红蛋白<80g/L）或诊断为心肌炎/心肌缺血/心律失常/心力衰竭，但心血管收缩压仍<60mmHg， 3）中枢神经系统功能障碍：癫痫/脑出血/脑梗塞/脑膜炎或昏迷的临床诊断，4）肝功能障碍：胆红素（总）≥42.7μmol/L，5）肾功能不全：肌酐≥177μmol/L，6）消化功能障碍：胃肠道出血的诊断

核苷酸序列和系统发育分析

根据制造商的说明，使用QIAamp DNA迷你试剂盒（QIAGEN，希尔登，德国）从全血样本中提取基因组DNA。如先前报道的那样，使用靶向483-kDa TSA基因56bp片段的引物进行巢式PCR[23]]。使用QIAquick凝胶提取试剂盒（Qiagen）纯化巢式PCR的扩增产物，然后送至Sangon Biotech（上海三贡）使用3730×1 DNA分析仪（应用生物系统，美国加利福尼亚州福斯特）进行正向和反向Sanger测序。使用DNASTAR SeqMan II对来自相同样品的2个56 kDa TSA基因序列进行比对，以获得用于进一步分析的确认序列。使用国家生物技术信息中心（NCBI）数据库将所得序列（GenBank入藏号ON862382—ON862498）与基本局部比对搜索工具（BLAST）进行比对，以确定最接近的序列。使用CLUSTAL X软件将新获得的核苷酸序列与来自全球NCBI数据库的最接近的相关序列和代表性序列进行比对。使用自举数为1000的邻域连接方法进行系统发育分析。

定量实时荧光定量PCR和O.津岳木西DNA负载

56 kDa TSA蛋白是一种主要的抗原决定簇，广泛用于O的诊断和定量。实时荧光定量PCR感染[24，25]。本研究基于O的56 kDa TSA基因开发了一种定量实时PCR检测方法。津岳（GenBank入库号：AY357216、AF050669、AY222631、AY222635和M33004）。使用引物5设计双标记探针（TaqMan）和引物，序列如下：5′TGATAAGATATTAAAGGGCATA 3′（Ot56KDa-F），5′ATACACCCTCAGCAGCATTAAT 3′（Ot56KDa-R）和5′[6-羧基荧光素]-ATGGTTGCATCAGGAGCACTTGG-[BHQ1] 3′（Ot56KDa-探针）。实时荧光定量 PCR 在含有 20 μL 模板 DNA、5 μL （1 μmol/L） 每个引物、10 μL （1 μmol/L） 探针、10 μL 10x 快速探针混合物（快速探针混合物，中国）、2.0 μL 4×低 ROX 和 50.2 μL 蒸馏水的 6 μL 反应混合物中进行。反应条件包括在95°C下初始活化5分钟，然后在40°C下进行5个循环，每次95秒，在10°C下60秒。

统计分析

使用SPSS软件版本19.0进行统计分析，并使用GraphPad Prism 6.0生成图形。非参数检验（Kruskal-Wallis检验）用于比较细菌DNA拷贝与指定组之间的差异。采用单因素方差分析（ANOVA）检验比较不同疾病严重程度组的病程和发热时最高体温。统计学意义设置为P < 0.05。使用斯皮尔曼相关性进行相关性分析。

结果

O的变异。恙虫病患者的 DNA 负载量

从 2018 年到 2021 年，从 FUO 住院患者中收集了 680 份血液样本，用于这项前瞻性观察研究。21例患者巢式PCR呈阳性，占FUO患者的142%（680/142）。对135例巢式PCR阳性患者进行实时荧光定量PCR检测，95例可检出细菌载量，检出率为135%（142/20），占FUO患者的135%（680/2）。中位数（四分位距 [IQR]，范围）O。津岳木DNA载量为92.10×<>3（442–21824， 66–3.3×106） 份/毫升。Tsutsugamushi对使用适当的抗生素治疗敏感，为了排除治疗的干扰，选择了117个先前未接受过抗生素治疗的患者的样本（使用其病历中的病史信息进行筛选），包括多西环素，四环素，氯霉素，利福平或阿奇霉素，用于进一步分析。117名患者最常见的症状包括发烧（117/117，100%），其次是焦痂或皮肤溃疡（44/117，38%）。其他非特异性症状包括寒战、头痛、乏力、咳嗽、淋巴结肿大和全身性肌痛（表 1）。中位数 （IQR） O.津岳木117例患者的DNA载量为3.11×103（470–21616） 拷贝/mL，范围在 44–3.3×10 之间6拷贝数/mL（图1）。大多数（87%）患者有O。津岳木DNA载量范围在1×10之间2和 1×105拷贝/mL，其中34例的DNA载量范围为102到 103拷贝数/mL，36 例，范围在 103和 104拷贝数/mL，32例范围在104和 105拷贝数/毫升。只有13%的患者DNA载量为≤102份数/毫升或≥ 105拷贝数/毫升。

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图1. 计算的 O 的直方图。津岳木117 名未接受适当抗生素治疗的恙虫病患者 DNA 载量（DNA 拷贝数/毫升血液）。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.g001

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表 1. 恙虫病患者的临床表现。

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O.津岳木DNA载量和基因型

基于通过嵌套PCR扩增的截短的56 kDa TSA蛋白基因序列进行系统发育分析（S1图）。结果表明，117例中，64例与Karp组密切相关，亚基因型A、B、C分别贡献29例、15例和20例。13例与Gilliam组密切相关，其中27例和4例分别来自JG-B和JG-G亚基因型，763例为未分型Gilliam。763例与TA3组密切相关，均为TA106926 A亚基因型。比较61组患者的DNA载量，结果表明，Karp组患者的DNA载量显著高于Gilliam组（平均值[SD]值：446370.52 [16994.09]拷贝/mL vs 40620.40 [0.01]拷贝/mL，P = 763.106926）和TA61组（平均值[SD]值：446370.52 [470.14]拷贝/mL vs 762.32 [0.001]拷贝/mL， P = 2.763）（图 0A）。Gilliam组和TA07组（P = 2.0）之间没有观察到显着差异（图21A）。进一步分析了亚基因型间样品的DNA载量，卡普组（P=0.059）或吉列姆组（P=2.2）亚基因型间无显著差异（图<>B和<>C）。

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图2. O.津岳木DNA载量和基因型。

采用克鲁斯卡尔-瓦利斯检验计算组间P值;* 代表P < 0.05;** 代表P < 0.01。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.g002

O.津岳木恙虫病患者的DNA载量和一般特征

在117名患者中，55%（64/117）为男性，45%（53/117）为女性。患者平均年龄为55.88岁±14.33岁，其中1例患者年龄<20岁（10岁）。在患者中，43%为41-60岁，这是最大的年龄组，其次是41%的61岁>患者。其中21例属于汉族，3例属于黎族。根据性别、年龄和种族对患者进行分组，并在各组之间比较DNA载量（图3A、3B和8145C）。黎族患者的DNA载量显著高于汉族（中位DNA载量为2177拷贝/mL vs 0拷贝/mL，P = 018.3）（图0C）。O无显著差异。津岳木不同性别（P = 48.0）和年龄（P = 60.3）患者的DNA负荷（图3A和<>B）。

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图3.

O.津岳木斑疹伤寒患者的DNA负荷和性别（A），年龄（B）和种族（C）。 采用克鲁斯卡尔-瓦利斯检验计算组间P值;* 代表P<0.05。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.g003

O.津岳木DNA载量和临床特征

77例RT-PCR阳性患者可获得详细的医学记录，根据这些病例分为轻度（N = 54），中度（N = 15）或重度（N = 8）。虽然O的中值。津岳木重度组的DNA载量远高于中度组（平均值[SD]值：210，094.25 [505，200.32]拷贝/mL vs 5，938.22 [8，908.11]，P = 0.11）和轻度组（平均[SD]值：210，094.25 [505，200.32]拷贝/mL vs 17，910.41 [38，752.41]拷贝/mL），这些差异无统计学意义（分别为P = 0.11和P = 0.21）（图4A ).比较了发病持续时间和发热时最高体温，不同疾病严重程度的44组间差异无统计学意义。此外，我们比较了（N = 67）和没有焦痂（N = 2）的患者之间的DNA载量差异，结果显示两组之间没有显着差异（图4B）。根据发病季节将患者分为4组：春季（4月至0月）、夏季（09月至4月）、秋季（117月至77月）和冬季（0月至272月）。O.津岳木患者DNA载量表明0组间差异无统计学意义（P=022.2）（图<>C）。还使用相关性分析评估了DNA载量与病程（N = <>）与发烧期间记录的最高体温（N = <>）之间的相关性。结果表明，只有最高体温（ρ=<>.<>，P =<>.<>）与O呈正相关。津岳木DNA载量（表<>）。

有人提出血液特征的变化与恙虫病的严重程度有关。因此，我们分析了白细胞计数（N = 85），淋巴细胞比（N = 44），中性粒细胞比（N = 64），血小板计数（N = 47），丙氨酸氨基转移酶（N = 55），天冬氨酸氨基转移酶（N = 53），总胆红素（TBil）（N = 28）和肌酐（N = 24）与DNA载量的相关性。结果表明，TBil与DNA载量呈正相关（ρ = 0.454，P = 0.015），而其他测试显示无显著相关性（表2）。

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图4.

O.津岳木DNA载量与疾病严重程度（A），焦痂（B）和疾病发作（C）。 采用克鲁斯卡尔-瓦利斯检验计算组间P值;* 代表 P < 0.05，** 代表 P < 0.01。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.g004

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表 2. O.津岳木斑疹伤寒患者的DNA负荷和临床检查特征。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.t002

讨论

在许多感染中，高细菌负荷是疾病严重程度的指标;然而，O.津岳木DNA载量和疾病严重程度尚未得到广泛研究。在这项研究中，我们分析了DNA载量与疾病严重程度O的关联。117例未接受适当抗生素治疗的患者的Tsutsugamushi基因型和临床因素。我们的结果表明，95.07%的巢式PCR阳性患者在实时荧光定量PCR检测中具有可检测到的细菌载量。已经开发了几种用于检测和定量分析O的实时PCR测定。tsutsugamushi感染，其中16S rRNA基因和膜蛋白56-kDa和47-kDa基因是最广泛使用的靶标[15，16，26]。在这项研究中，我们开发了一种用于定量O的实时PCR测定。tsutsugamushi靶向O的56-kDa TSA基因。tsutsugamushi，并且该测定与巢式PCR测定显示出良好的一致性。

中位数 O.津岳木这项研究中的DNA载量为3.11×103拷贝/毫升，范围在 44 和 3.2×10 之间6拷贝数/毫升。然而，这种负荷因研究而异;辛格西拉克等.报告的中位数为 4.2×106拷贝数/毫升（量程，1×106–2.88 ×107拷贝/mL）在47例RT-PCR阳性患者中使用实时PCR靶向7 kDa基因，而Kim等人。报告的中位数为 7.8×104存活患者的拷贝数/mL（范围 3，960），中位数为 8.38×107244例使用相同引物和探针的非存活患者的拷贝/mL（范围600，3）[15，16]。Sonthayanon等人报告的O的中位数为284拷贝/mL。津岳木124例患者的DNA（范围，943-81拷贝/mL），靶向16 S rRNA的RT-PCR定量结果呈阳性[15]。除了种群，恙虫物种和O.据认为，细菌载量的变化部分受RT-PCR检测选择的靶基因和这些研究的纳入标准的影响[15]。

恙虫病的死亡率在所研究的地区之间差异很大，这种变异的原因在很大程度上仍然未知;然而，分布为O.Tsutsugamushi基因型被认为在这种变异中起重要作用[16]。Karp和密切相关的菌株见于大多数流行国家，包括日本、韩国、中国、泰国和东南亚[12，13，27]。亚基因型的主导地位因国家而异：韩国以鲍龙为主，日本Karp_C，台湾、泰国和柬埔寨Karp_A[13，27]。Gilliam组的几个亚基因型在流行国家也很普遍：川崎基因型在韩国很普遍，JG-C基因型主要分布在台湾、泰国和柬埔寨[27]。属于TA763和Kato组的分离株主要在台湾报道[27]。每个基因型的遗传成分的特征可以影响O的能力。荚蒾入侵宿主，大量生长，传播。研究发现，恙虫病的严重程度和临床表现在人类和实验动物中均呈菌株依赖性[7，28]。O原型之间的临床特征差异。也有报道。与 Karp 丛集感染的患者相比，Boryoung 集群感染的患者具有显着更多的全身无力、焦痂、皮疹、结膜充血、高白蛋白水平以及更高的 ESR 和纤维蛋白原水平;然而，Karp簇对现有抗生素的治疗反应明显慢于Boryoung簇[14]。此外，卡普基因型被提议为严重的基因型。我们的结果一致表明，卡普与患者的严重临床特征相关。Karp基因型的DNA载量显著高于Gilliam和TA763基因型，表明O的繁殖更有效。tsutsugamushi和在卡普基因型感染中的免疫清除速度较慢。在C57BL/6NJcl小鼠中也报告了类似的结果，与毒性较低的菌株UT176相比，Karp基因型的细菌载量更高[29]。

宿主种群的遗传差异可能会影响对O的易感性和反应。tsutsugamushi感染，被认为是影响DNA载量的另一个因素。在印度讲泰米尔语的达罗毗荼族群中分析了TLR2、TLR4和HSP70基因中的单核苷酸多态性（SNPs），这些多态性导致免疫应答变异并改变对各种传染病的易感性，发现恙虫病患者TLR4D299G SNP的患病率显著高于对照组[30].一项针对韩国擦洗斑疹伤寒患者的全基因组关联研究（GWAS）发现，8个强效擦洗斑疹伤寒相关SNP位于PRMT6、PLGLB2、DTWD2、BATF、JDP2、ONECUT1、WDR72、KLK、MAP3K7和TGFBR2基因[31]。 一项使用吉列姆菌株的小鼠研究发现，O.由于小鼠品系之间的遗传差异，Tsutsugamushi感染显示出显着不同程度的毒力[32]。此外，O的致死和非致死小鼠模型的比较。Tsutsugamushi感染显示两组CD4+和CD8+T细胞群相关细胞因子存在差异[2]。值得注意的是，在本研究中，黎族患者的DNA载量明显高于汉族。验证差异是否由感染O引起。分析了汉族和黎族基因型的组成。汉族（N=33）的主要基因型为卡普族（N = 51， 30%）、吉列姆族（N = 59， 18%）和TA35（N = 763， 3%），黎族（N=6）为卡普族（N = 21， 13%）和吉列姆族（N = 62， 8%）。统计分析表明，两个民族的基因型差异不显著。此外，38%（95/20）的黎族患者是在琼中李苗族自治县招募的。该县位于海南岛的中心，大部分地区都是森林多山。该地区的大多数患者是森林工人或橡胶工人。相比之下，在海口招募的患者大多来自沿海城市，植被从琼中开始变化。来自海口的患者也有各种职业，包括农民和工厂工人。生态和行为因素的这些差异也可能导致O的差异。津岳木黎族和汉族患者之间的DNA负荷。评估这些患者中SNP的存在将是有趣的，这可能解释免疫反应和对O的易感性的变化。津嘎木希感染。

松塔亚农等.据报道，肝酶与O呈正相关。津岳木在泰国东北部招募的患者的DNA载量[15]。相比之下，我们发现O没有显着差异。津岳木重度、中度和轻度组之间的 DNA 载量。这与血液学指标与 DNA 载量之间没有相关性的发现一致，除了 TBil 与 DNA 载量呈正相关，这表明肝损伤。焦痂是恙虫病的典型临床体征，据报道，患者焦痂的患病率差异很大（7%-80%），并且在很大程度上依赖于O。津岳木氏基因型[14，34]。据报道，焦痂的存在与Sonthayanon等人的研究中的DNA负荷相关;然而，尽管在有体格检查数据的患者中观察到40.5%（45/111）存在焦痂，但有和没有焦痂的患者之间没有显著差异[15]。本研究与Sonthayanon等人的研究在DNA负荷与临床特征的相关性分析方面的差异。可能是由于多种因素造成的。研究中的人群由Sonthayanon等人报告。在泰国东北部，主要是泰国人，而我们的研究人群主要是汉族和黎族。此外，差异可能与捁骨有关。据报道，泰国恙虫病的主要媒介是钩端斑疹伤寒，L。德利恩斯和L.清莱恩斯。相比之下，虽然海南岛的载体研究不广泛，但主要报道的载体是L。德利恩斯[35，36]。被不同种类的恙虫咬伤可能导致人和小鼠的临床特征差异，这也可能与O有关。津岳木DNA载量[37，38]。

该研究的主要局限性在于纳入了少数恙虫病病例。此外，只有77名患者有详细的医疗文件。该研究的另一个局限性是，只有一些病例具有详细的血液图谱，包括表2所示的所有指标，因为具有不同症状的患者的临床试验项目不同。这可能导致相关性分析获得的结果存在偏差。建议在未来的研究中使用具有更多临床数据的更大样本队列来探索O之间的关系。津岳木擦洗斑疹伤寒患者的DNA载量和临床特征。

结论

总之，我们的研究表明，基因组DNA载量为O.Tsutsugamushi与其基因型，患者的种族，发烧时记录的最高体温和血液中的总胆红素（TBil）有关。然而，O.津岳木在比较轻度、中度和重度患者组时，以及在比较有或没有焦痂的患者组时，都发现了DNA载量。本研究有助于了解O.津冢。

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东方椿截短56 kDa TSA蛋白基因序列的系统发育分析.

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补充图1.截短56 kDa TSA蛋白基因的系统发育分析的序列东方津冢.系统发育分析使用软件 MEGAX。采用邻域连接法构建系统发育树自举 1000 重复。

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S1 图 东方椿截短56 kDa TSA蛋白基因序列的系统发育分析.

使用MEGAX软件进行系统发育分析。采用邻域连接方法构建系统发育树，自举次数为1000次重复。

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0011243.s001

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确认

作者感谢所有参与本研究的患者，以及海南医科大学新兴热带传染病科学创新组和海南省热带传染病生物库的支持。

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